NIKON A1 RSi
Le microscope confocal est un microscope optique qui a la propriété de réaliser des images de très faible profondeur de champ (de 150 à 400 nm environ) appelées « sections optiques ». En positionnant le plan focal de l'objectif à différents niveaux de profondeur dans l'échantillon, il est possible de réaliser des séries d'images à partir desquelles on peut obtenir une représentation tridimensionnelle de l'objet. L'objet n'est donc pas directement observé par l'utilisateur ; celui-ci voit une image recomposée par un logiciel dédié.
Le microscope Nikon A1 Rsi est adapté à l'imagerie confocale en système fixé ou vivant (température/CO2 contrôlés),
Des rais laser à 405, 457, 488, 514, 568, 647 nm modulés par AOTF sont utilisés afin d'illuminer l'échantillon, le signal fluorescent émis est détecté, amplifié et converti par des tubes photomultiplicateurs PMT.
L'acquisition de piles d'images particulièrement bien résolues en Z permet de reconstruire en 3 dimensions l'objet analysé:
reconstruction en 3D de la même série d'images
Imagerie Haute Vitesse
Le microscope A1 est doté d'un scanner dit "resonant" permettant de réaliser des images à haute vitesse (jusqu'à 420images/sec en 512x32 pixels) en mode résonnant
Tête de scan du Nikon A1
De plus, la platine est dotée d'un système piezo-électrique autorisant des déplacements en Z très rapide
Déconvolution Spectrale
Mesures de Dynamiques de Fluorescence
Imagerie par photoactivation/photobleaching (FRAP, FLIP etc...)
La mesure de retour de fluorescence après photo-blanchiment (Fluorescence Recovering After Photobleaching; FRAP) peremt de mesurer des dynamiques à l'échelle moléculaire telles que la mobilité d'une molécule marquée, son éventuelle multimérisation, le passage d'un compartiment subcellulaire à un autre etc...
Contributing Authors (flash animation)
Amy M. Cusma, Matthew Parry-Hill and Michael W. Davidson - National High Magnetic Field Laboratory, 1800 East Paul Dirac Dr., The Florida State University, Tallahassee, Florida, 32310.
Comptage de Photons Uniques
La plateforme PIcell est dotée de 2 microscopes Nikon A1 RSi couplé à un système de comptage de photons uniques (Time-Correlated Single Photon Counting; TCSPC) permettant de réaliser des mesures de temps de vie de fluorescence (Fluorescence Lifetime IMaging; FLIM) ou de spectroscopie de corrélation de fluorescence (Fluorescence Correlation Spectroscopy; FCS).
Déconvolution
Au même titre qu'une (série d') image(s) obtenue en microscopie champ-large (widefield), les images obtenues en microscopie confocale peuvent être traitées via un logiciel de déconvolution afin d'améliorer la résolution en X, Y et Z.